Técnicas de siembra de microorganismos

Los microorganismos están en todas partes. Esto ha sido probado de muchas maneras. Pero, ¿cómo hacemos para ver a estos microorganismos de alguna manera que nos permita identificarlos? Sabemos que los microorganismos necesitan nutrientes para crecer, con lo que podemos cultivarlos en medios de cultivo con los nutrientes apropiados. Si realizamos un medio de cultivo sólido, lo esterilizamos y lo colocamos en una placa de Petri estéril, podremos cultivar microorganismos en esta placa. Esto lo podemos lograr mediante distintas técnicas de siembra.

Estriado en placa: Con un ansa de metal estéril se esparce una muestra. Se divide generalmente en 4 partes. Se esparce la muestra en un sector de la placa y se esteriliza el ansa. Se toca la zona donde se esparció y se repite (hacer un esquema).

Técnica de estriado en placa

Siembra en superficie: Con un volumen nunca mayor a los 0,5 ml. Se pone una gota de la muestra sobre el medio de cultivo y se esparce con espátula de Drigalsky esterilizada a la llama.

Siembra en profundidad (para recuento de microorganismos): Se enfría el medio de cultivo con agar hasta 45 ºC. Se pone una gota de 1 ml de la muestra y se vierte encima el MC. Se agita suavemente en 8 la placa y se deja enfriar. Luego se cultiva.

Reducción de carga microbiana

Muchas veces, al tomar una muestra para analizar uno se encuentra con el problema de que esta posee demasiados microorganismos. Si tratamos de sembrarlos en un medio de cultivo lo único que va a ocurrir es que crecerán tantos microorganismos juntos que seremos incapaces de verlos. Por esta razón es necesario reducir la cantidad de microorganismos en la muestra inicial (reducción de carga microbiana). Una opción para lograr esto es utilizar el sistema de diluciones decimales. Las diluciones decimales buscan disminuir la cantidad de microorganismos de manera controlada y medible a través de diluir la muestra 10 veces por cada paso. En la muestra original uno tiene una concentración X de microorganismos. Al realizar una dilución decimal tendré X/10 microorganismos y así sucesivamente. Esto no solo me permitirá disminuir la cantidad de microorganismos sino que puede ser útil para contabilizarlos.

Técnica de diluciones decimales

Nota: SF (Solución Fisiológica); TC (Tal Cual, expresa a la condición de la muestra

Cuantificación de microorganismos

En la cuantificación de microorganismos se utiliza comúnmente el recuento de UFC (unidades formadoras de colonias). En teoría cada colonia pura que crezca en un medio de cultivo corresponderá a 1 sola célula. De esta manera, al sembrar una muestra en un medio de cultivo y contar las colonias se puede contar el número de células que había en la muestra. Si la cantidad de colonias en media placa es superior a las 300 se dice que la muestra es “muy numerosa para ser contada” (MNC).

¿Para qué sirve saber cuántos microorganismos hay en una muestra?

La microbiología cuantitativa se utiliza principalmente para saber si en una determinada muestra la cantidad de microorganismos es grande o pequeña. Esto es muy importante, por ejemplo, en bromatología. Para un lugar de trabajo (una mesada, una tabla de carnicero, una máquina de pan) la cantidad de microorganismos permitida no puede ser superada, ya que eso implicaría un serio riesgo de salud para el consumidor. También sirve cuando hablamos de microorganismos patógenos. La microbiología cuantitativa permite establecer límites de tolerancia de presencia de microorganismos en una muestra, lo que también sirve para establecer parámetros de calidad. La microbiología cuantitativa es muy utilizada en la bromatología al momento de realizar inspecciones en locales de venta de alimentos al público (carnicerías, verdulerías, fábricas de alimentos de venta directa).