Técnicas de siembra en medios de cultivo

Trabajo Práctico

Siembra en Medios de Cultivo

Objetivos: Los objetivos del presente práctico son que el alumno se interiorice en las distintas técnicas de siembra de microorganismos en medio sólido utilizadas comúnmente en la microbiología. Asimismo, se espera que el alumno se percate de la diversidad microbiana que lo rodea, de los distintos hábitats en los que se encuentran los microorganismos y de las formas de manipulación seguras de estos.

Materiales:

Pipetas 10 ml	Hisopos	Espadol/Alcohol 70
Pipetas 1 ml	Algodón	Tubos de ensayo
Cinta adhesiva	Espátula de Drigalsky	Estufa de cultivo

Metodología:

En éste práctico usaremos las placas de Petri con los medios de cultivo que ya hemos preparado anteriormente (Agar Papa y YPD). Se dividirá el curso en 2 grandes grupos que trabajaran con las siguientes áreas:

·      Superficies

•  De plantas y mesadas
•  Del cuerpo humano

·      Hisopados

• Del inodoro del baño de hombres
• Del inodoro del baño de mujeres

Para cada área se aplicaran distintas técnicas. Es indispensable que todos los alumnos se interioricen en el proceso de ambas, ya que son de uso común en la microbiología ambiental.

Luego de sembrar las placas estas se incubaran o bien en estufa o bien a temperatura ambiente según indique el profesor.

Metodología específica para aislamiento de microorganismos de superficie:

Marcar en la base de la caja de Petri 2 líneas perpendiculares entre sí, de tal manera de que la superficie quede separada en 4 sectores. Rotular cada sector como A, B, C y D. Cortar una cinta adhesiva de 10 cm de longitud y doble uno de los extremos sobre sí mismo en aproximadamente 2 cm para proporcionar un extremo no adhesivo. Tomando la cinta por el extremo no adhesivo, colocar el lago adhesivo sobre la superficie de elección y presionar suavemente sobre la cinta. Una vez que la cinta se adhirió tire de ella de una sola vez y colóquela inmediatamente sobre el medio de cultivo de la caja de Petri utilizando 1 cuadrante para cada muestra (Figura 1). Presione suavemente la cinta sobre el medio de cultivo para transferir los microorganismos, pero asegúrese de no tocar el medio de cultivo con sus dedos.

Figura 1 Siembra en medio de cultivo sólido con cinta adhesiva

Metodología específica para aislamiento de microorganismos por hisopado:

Tome un hisopo de la caja asegurándose de no tocar ambas puntas del mismo con las manos. Frote el hisopo contra el borde interno del vaso del inodoro en una superficie de 1 cm² aproximadamente haciendo girar el hisopo para que toda su superficie se impregne. Una vez concluido esto corte la punta del hisopo que utilizó y tirela dentro del tubo con solución fisiológica que esté rotulado como Muestra Tal Cual (MTC). Agite bien el tubo y tome una muestra de 1 ml para transferirla a otro tubo con solución fisiológica rotulado como 10^-1. Con la misma pipeta homogenice la muestra del tubo y transfiera 1 ml de este al tubo rotulado como 10^-2.

Rotule 3 cajas de Petri como MTC, 10^-1 y 10^-2. Tome 0,1 ml del tubo 10^-2 y viértalo en el centro de la placa rotulada como 10^-2. Repita este procedimiento para los restantes tubos. Asegúrese de homogeneizar las muestras antes de sembrarlas. Una vez sembrada esparza la gota de líquido en la placa con una espátula de Drigalsky previamente flameada con alcohol.

Responder las siguientes preguntas:

1. ¿Alguna superficie se encontraba libre de microorganismos?
2. ¿Los microorganismos aislados de las superficies de las plantas difieren de la de la piel?
3. ¿Hay diferencias en los microorganismos aislados del baño de hombres y de mujeres?
4. ¿Para qué se incuban las placas a distintas temperaturas?
5. ¿Qué efecto generan los distintos medios de cultivo sobre la diversidad de microorganismos?